Принцип метода:
Относительная плотность мочи составляет в норме 1,015-1,025 г/см 3 . Определение относительной плотности мочи производят с помощью специальных ареометров небольшого размера, называемых урометрами. Урометры бывают двух типов: первый - для мочи с низкой и нормальной относительной плотностью (с делениями от 1,000 до 1,030 г/см 3), второй - для мочи с высокой относительной плотностью (с делениями от 1,030 до 1,060 г/см 3).
ХОД РАБОТЫ
В небольшой цилиндр с таким диаметром, чтобы урометр свободно плавал в нем, наливают по стенке исследуемую мочу и осторожно погружают в нее урометр. Производят отсчет, беря ту линию на шкале урометра, которая соответствует нижнему мениску жидкости. Все определения производят при температуре 20 0 С, поскольку шкала урометра проградуирована в соответствии с этой температурой. Если моча имеет другую температуру, то на каждые 3 0 С свыше этой температуры нужно прибавить, а на каждые 3 0 С ниже – убавить по 0,001 от показания шкалы урометра.
Обнаружение патологических компонентов мочи
1. Качественные реакции на обнаружение белка в моче – а) проба Геллера с концентрированной азотной кислотой
Принцип метода:
Концентрированная минеральная кислота НNO 3 вызывает денатурацию белка и образует комплексные соли белка с кислотой. На границе двух слоев жидкостей образуется осадок в виде небольшого белого кольца.
Ход работы
В пробирку наливают 1 мл концентрированной НNO 3 , наклоняют пробирку под углом 45 0 и осторожно по стенке пипеткой наслаивают 1мл мочи.
б) проба с концентрированной сульфосалициловой кислотой
Принцип метода:
Концентрированная органическая сульфосалициловая кислота вызывает денатурацию белка. Выпадение белка в виде осадка или мути связано с дегидратацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами.
Ход работы
К 1 мл мочи приливают 3 капли 20% сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче образуется белый осадок.
2. Количественное определение белка в моче с помощью
тест – полоски «Альбуфан» .
Принцип метода:
Тест основан на принципе «белковой ошибки индикатора». Реактивная зона содержит кислородный буфер и специальный индикатор, который в присутствии белков меняет цвет с желтого через зеленый до синего.
Тест высокочувствителен к альбумину и реагирует на его присутствие в моче при концентрации 0,10-0,15 г/л. Высокомолекулярные белки, такие как иммуноглобулины, измеряются с меньшей чувствительностью, чем альбумины. Низкомолекулярные белки, такие как бета-2 микроглобулин, белок Бенс -Джонса практически не выявляется этим тестом.
Оценка теста: положительным тест считается в том случае, если меняется цвет реактивной зоны. В зависимости от концентрации альбумина в моче реактивная зона может приобретать оттенок от зеленого до синего. Эти оттенки сравниваются с цветной шкалой, зоны которой соответствуют концентрации белка 0,3, 1, 3, 10 г/л.
ХОД РАБОТЫ
Тест-полоску, не касаясь реактивной зоны руками, опустить на 1-2 секунды в исследуемую мочу так, чтобы зона была смочена. Затем удалить излишки мочи с полоски и приблизительно через 1 минуту сравнить окраску зоны индикации с цветной шкалой на наборе и определить количество белка, которое выражено в г/л.
Занятие №3.
Тема: Определение белка в моче.
Цель: Изучить исследование химических свойств мочи.
Задачи:
Изучить количественные и качественные методы определения белка в моче;
Изучить основные принципы работы с тест-полосками на автоматических анализаторах.
Тип занятия: практическое (6ч)
Планируемые результаты:
Студент должен знать:
Качественные пробы для определения белка.
Метод Робертса – Стольникова.
Определение белка 3 % ССК.
Биуретовый метод определения белка (ТХУ).
Диагностическое значение исследования показателей.
Виды протеинурий.
Студент должен уметь:
Подготовить рабочее место к исследованию мочи.
Приготовить реактивы, посуду и оборудование к исследованию.
Определять химические свойства мочи (белок в моче качественными и количественными методами).
Работать с бланочной продукцией (оформление бланков анализа).
Правильно интерпретировать полученные результаты исследования.
Средства достижения поставленной цели:
1. Работа с конспектами, учебной и специальной литературой.
2. Подготовка к практическим занятиям с использованием методических рекомендаций преподавателя, выполнение и оформление практических работ.
3. Работа с информационными средствами обучения на электронных и бумажных носителях.
Оборудование учебного кабинета и рабочих мест кабинета:
посадочные места по количеству обучающихся;
рабочее место преподавателя;
специализированная мебель и оборудование.
Технические средства обучения:
компьютеры для оснащения рабочего места преподавателя и обучающихся;
технические устройства для аудиовизуального отображения информации;
аудиовизуальные средства обучения (презентация, учебный видеосюжет).
Результатом освоения урока является:
Формирование практических профессиональных умений и первоначального практического опыта, в том числе профессиональными (ПК ) и общими ( ОК ) компетенциями:
ПК 1.1 . Готовить рабочее место для проведения лабораторных общеклинических исследований.
ПК 1.2 . Проводить лабораторные общеклинические исследования биологических материалов.
ПК 1.3 . Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 1.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.
ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.
ОК 2 . Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.
ОК 9 . Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
I модуль. Теоретическая часть с элементами самостоятельной работы
Задание №1. Изучите и законспектируйте учебный материал в рабочие тетради.
М оча здорового человека обычно содержит менее 0,002 г/л и редко до 0,012 г/л белка и как правило такое содержание белка в моче называют «в виде следов» и общепринятыми (унифицированными) химическими методами в моче здорового человека не определяется.
Содержание белка в порциях мочи, собранной в разное время суток, может колебаться в значительных пределах.
П оявление белка в моче называется протеинурия.
В зависимости от суточной потери белка различают следующие степени протеинурии: умеренная - до 1 г; средняя - от 1 до 3 г; выраженная - более 3 г.
Существует два основных вида протеинурии:
Протеинурии, обусловленные заболеваниями мочевыводящих путей;
протеинурии, при поражениях (заболеваниях) почек.
Протеинурии, связанные с воспалительными процессами мочевыводящих путей, сопровождаются появлением в моче значительного количества лейкоцитов или эритроцитов, что, однако, не позволяет исключить одновременного попадания белка в мочу из почечной паренхимы; содержание белка редко превышает 1 г/л.
Почечная протеинурия в большинстве случаев связана с повышенной проницаемостью гломерул и делится на 2 группы :
физиологическая протеинурия;
патологическая протеинурия.
К физиологической протеинурии относят случаи временного появления белка в моче, не связанные с заболеваниями:
после приема большого количества пищи, богатой не денатурированными белками (сырое мясо, сырые яйца);
при интенсивной мышечной работе (продолжительные походы, спортивные соревнования);
при приеме холодной ванны или душа;
при сильных эмоциональных переживаниях;
при эпилептических приступах.
Различают ортостатическую, или юношескую, протеинурию, встречающуюся у детей и подростков и проходящую с возрастом. В дифференциально - диагностическом отношении имеет практическое значение то, что ортостатическая альбуминурия обнаруживается нередко в период выздоровления после острого гломерулонефрита.
Патологическая почечная протеинурия может быть следствием органических заболеваний почек и других органов и систем: острые гломерулонефриты; хронические гломерулонефриты; острые пиелонефриты; хронические пиелонефриты; нефропатии беременных; различные заболевания, сопровождающиеся лихорадкой; выраженная хроническая сердечная недостаточность; а милоидоз почек; липоидный нефроз; туберкулез почки; геморрагические лихорадки; геморрагический васкулит; выраженная анемия; гипертоническая болезнь и др.
Задание №2. Перепишите и зарисуйте схемы лабораторных методов определения белка в моче.
Лабораторные методы определения белка в моче
Существуют качественные и количественные методы определения белка в моче, они основаны на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота); при этом измерение степени коагуляции делает пробу количественной.
Качественные методыпроба с 20% сульфосалициловой кислотой (унифицированная);
кольцевая проба Геллера (в настоящее время не используется);
обнаружение белка с помощью индикаторной бумаги (полосок) и тест-полосок.
Количественные методы
унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова;
с 3% сульфосалициловой кислотой.
Качественные методы определения белка в моче
Задание №3. Определение белка в моче с помощью у нифицированной пробы с 20% сульфосалициловой кислотойПринцип метода: основан на коагуляции белка в объеме мочи или на границе сред (моча и кислота)
20% сульфосалициловой кислоты (2-гидрокси-5-сульфобензойная кислота C 7 H 5 0 6 S ).
фильтровальная бумага
3мл профильтрованной мочи
2 шт. химические пробирки
Ход исследования:
В две пробирки вносят по 3 мл профильтрованной мочи, в одну из них (опытную) прибавляют 6-8 капель сульфосалициловой кислоты. На темном фоне сравнивают обе пробирки.
Помутнение в опытной пробирке свидетельствует о наличии в моче белка - проба положительна.
Примечание. Мочу со щелочной реакцией перед исследованием подкисляют добавлением нескольких капель 10% раствора уксусной кислоты
Задание №4. Определение белка с помощью кольцевой пробы Геллера
Принцип метода: В основу положена кольцевая проба, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота – моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.
Посуда, оборудование и реактивы:
Химическая пробирка;
- реактивы: 30% раствор азотной кислоты ( HNO 3) ( d = 1,2) или реактив Ларионовой : 20- 30 г хлорида натрия (NaCl ) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO 3.
Ход исследования:
HNO 3
Интерпретация полученных результатов:
Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин тонкого белого кольца указывает на наличие белка в моче.
Количественное определение белка
Принцип метода: В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота - моча) при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.Посуда, оборудование и реактивы:
Химическая пробирка;
Реактив Ларионовой;
Фильтровальная бумага;
Биологическая жидкость (моча);
Дистиллированная вода.
Ход исследования:
В пробирку наливают 1 - 2 мл 30% раствора HNO 3 или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.
Интерпретация полученных результатов:
Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й мин
тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2-х мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления.
При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком - в 4 раза, при компактном - в 8 раз и т.д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.
Примечание:
Белое кольцо может образовываться при наличии большого количества уратов; в отличие от белкового оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании.
Задание №6. Определение количества белка в моче с 3 % сульфосалициловой кислотой
Принцип метода: Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой
Посуда, оборудование и реактивы:
3% раствор сульфосалициловой кислоты ( C 7 H 5 O 6 S ); j
0,9% раствор хлорида натрия;
1% стандартный раствор альбумина - 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия ( NaN 3). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.
Ход исследования:
В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора хлорид е натрия. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построение которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу) . Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.
Приготовление разведений для построения калибровочного графика
пробиркиСтандартный раствор, мл
0,9% раствор хлорида натрия, мл
Концентрация белка, г/л
0,05
9,95
0,05
0,1
9,9
0,1
0,2
9,8
0,2
0,5
9,5
0,5
1,0
9,0
1,0
Примечание:
Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.
При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгеноконтрастных соединений. Ложноположительные J реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.
Зарисуйте схему определения белка
Задание №7. Обнаружение в моче белка Бенс-ДжонсаПринцип метода:
основан на реакции термопреципитацииПосуда, оборудование и реактивы:
Реактив:
2М ацетатный буфер рН 4,9.Профильтрованная моча;
Водянная баня.
Ход исследования:
4 мл профильтрованной мочи смешивают с 1 мл буферного раствора и нагревают 15 мин на водяной бане при температуре 56°С.
Интерпретация полученных результатов:
При наличии в моче белка Бенс-Джонса уже в первые 2 мин появляется выраженный осадок.
Примечание:
При концентрации белка менее 3
г/л проба может быть отрицательна, что встречается довольно редко, так как обычно концентрация белка Бенс-Джонса в моче весьма значительна.Наиболее достоверно выявление белка Бенс-Джонса осаждением при температуре 40-60°С. Однако в слишком кислой (рН менее 3,0) или слишком щелочной (рН более 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и низкой концентрации бежа Бенс-Джонса (менее 3 г/л) осаждение может не происходить.
Зарисуйте схему определения белка
II
модуль. Самостоятельная работа с исследовательским этапомМетодические установки:
Задание №1.
Изучите и законспектируйте приложение №1 «Задание №2.
Получите образцы биологической жидкости (мочи) у преподавателя, пронумеруйте образцы;
Проведите исследование мочи с помощью диагностических тест-полосок;
Результат запишите в бланки анализа, сдайте их преподавателю.
Приложение №1
«
Обнаружение белка с помощью диагностических тест-полосок»Принцип.
Белок изменяет цвет индикатора, нанесенного на полоску. Индикаторы упакованы в комплекте по 100 полосок, которые хранятся в плотно закрытом пенале, прохладном и сухом месте.Правила работы с диагностическими тест-полосками
При работе с диагностическими тест-полосками необходимо соблюдать следущие правила:
Держать диагностические тест-полоски в плотно закрытых упаковках-пеналах;
Хранить пеналы в темном, сухом, прохладном месте при температуре, не превышающей 30ºС, но не в холодильнике;
Не подвергать полоски действию влаги и прямого солнечного света, высокой температуры и летучих химических веществ;
Доставать только строго необходимое количество полосок, после чего немедленно закрывать пенал;
Не дотрагиваться пальцами до диагностических зон.
Правила проведения теста
1. Для исследования используйте утреннюю мочу, собранную в одноразовый пластиковый контейнер для мочи (или чистую сухую посуду). Перемешайте доставленную мочу, но не центрифугируйте.
В
нимание!При использовании нестандартной приспособленной тары остатки моющих средств в посуде для сбора мочи являются причиной ложных результатов.
2. Из пенала возьмите тест-полоску.
3. Сразу же закройте пенал фабричной крышкой, полоску охраняйте от влаги.
4. Индикаторные бумажные зоны полоски опустите на 2-3 секунды в исследуемую мочу и сразу же выньте.
5. Для удаления избытка влаги с диагностических зон полоски проведите ее длинным краем по краю контейнера (или иной емкости, в которой доставлена моча) или приложите этот край полоски к фильтровальной бумаге.
Смывать с диагностических зон полоски лишнюю мочу нельзя!!!
6. По истечении времени, указанного на этикетке пенала или в инструкции к каждому тесту, сравните цвет соответствующей диагностической зоны с цветной шкалой на этикетке пенала с полосками (эталоном). Порядок проведения теста представлен рисунками 1-7.
7.
Реакцию оценивают как положительную или отрицательную. Или выражают в цифровом обозначении в г/л. (см. рисунок №8).Рис. №8
Оценка результатов исследованияIII
Модуль. Контрольные вопросы и заданияОтветьте на поставленные вопросы, используя рабочую тетрадь
Расскажите метод определения белка в моче 50% азотной кислотой.
Расскажите метод определения белка в моче 20 % ССК.
Расскажите методику определения белка в моче методом Робетса – Стольникова – Бранберга.
Расскажите методику определения белка в моче диагностическими тест- полосками.
Какие существуют правила работы с диагностическими тест-полосками.
Назовите основные критерии правильно проведенного теста.
Расскажите методику обнаружения в моче белка Бенс-Джонса.
Диагностическое значение определения химических свойств мочи.
Клиническая оценка химических свойств мочи.
Запишите в рабочей тетради термины и дайте им обозначение
Знать теоретический и практический материал.
Отвечать на контрольные вопросы.
Знать термины.
Литература для самостоятельной подготовки:
И.И.Миронова, Л.А.Романова, В.В.Долгов. Общеклинические исследования: моча, кал, ликвор, эякулят.- М.-Тверь: ООО "Издательство "Триада", 2005
Ты - не раб!
Закрытый образовательный курс для детей элиты: "Истинное обустройство мира".
http://noslave.org
Материал из Википедии - свободной энциклопедии
Проба Геллера , по имени австр. патолога И. Ф. Геллера (J.F. Heller), распространенное название качественной реакции на белок в моче . Проба имеет чувствительность 0,033 г/л и используется в клинической диагностике протеинурии . Принцип выявления белка основан на его денатурации под воздействием денатурирующего фактора - концентрированной азотной кислоты или реактива Ларионовой .
Следует отметить, что в моче всегда присутствует некоторое количество белка, но, как правило, его концентрация в моче здорового человека ниже порога чувствительности качественной реакции и не выявляется простыми методами. Для количеств белка свыше 0,033 г/л проба непригодна. При более высоких концентрациях необходимо разбавлять мочу или использовать альбуминометр Эсбаха.
Для определения количества общего белка в моче используются метод, основанный на пробе Геллера - метод Брандберга-Робертса-Стольникова (W. Roberts, 1830-1899, англ. терапевт). Методика предполагает разведение мочи до нижнего предела чувствительности пробы (0,033 г/л) и времени образования кольца в 2-3 минуты.
Ход выполнения анализа
Реактивы: концентрированная (дымящаяся) азотная кислота или реактив Ларионовой. Исследуемая моча должна быть прозрачной и иметь кислую реакцию.
Приготовление реактива Ларионовой
Приготавливают насыщенный раствор хлорида натрия (20-30 г соли растворяют в 100 мл теплой воды, дают отстояться до охлаждения). Надосадочную жидкость сливают и фильтруют. К 99 мл фильтрата добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты (можно заменить 2 мл соляной кислоты).
Техника исследования
В пробирку с 1-2 мл реактива осторожно по стенке наслаивают примерно такое же количество мочи. При наличии белка, примерно через 2-3 минуты, на границе раздела жидкостей наблюдается помутнение - белое кольцо из денатурировашего белка.
Ложноположительный результат может появиться при использовании азотной кислоты, за счет высокой концентрации нуклеоальбуминов или солей уратов. В первом случае оно исчезает при легком покачивании пробирки, а во втором кольцо располагается значительно выше границы раздела сред и исчезает при нагревании; при повторении пробы с разбавленной мочой кольцо не образуется. Иногда также появляется коричневатое пигментное кольцо от окисления урохрома азотной кислотой.
Использование реактива Ларионовой, в отличие от азотной кислоты, имеет ряд преимуществ: на границе наслоения не образуется пигментных колец, а положительный результат дает более четкие белковые кольца.
См. также
Напишите отзыв о статье "Проба Геллера"
Ссылки
Литература
[[К:Википедия:Статьи без изображений (страна: Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. )]][[К:Википедия:Статьи без изображений (страна: Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. )]]Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба Геллера Ошибка Lua: callParserFunction: function "#property" was not found. Проба ГеллераОтрывок, характеризующий Проба Геллера
Мне было до дикости больно и грустно за них, за себя, и за всех, кто боролся, всё ещё веря, что могут что-либо изменить... Да могли ли?.. Если все, кто боролся, лишь погибали, имела ли смысл такая война?..Вдруг прямо передо мной возникла другая картина...
В той же маленькой каменной «келье», где на полу всё ещё лежало окровавленное тело Магдалины, вокруг неё, преклонив колени, стояли Рыцари её Храма... Все они были непривычно одеты в белое – снежно белые длинные одежды. Они стояли вокруг Магдалины, опустивши свои гордые головы, а по суровым, окаменевшим лицам ручьями бежали слёзы... Первым поднялся Волхв, другом которого когда-то был Иоанн. Он осторожно, будто боясь повредить, опустил свои пальцы в рану, и окровавленной рукой начертал на груди что-то, похожее на кровавый крест... Второй сделал то же самое. Так они поочерёдно поднимались, и благоговейно погружая руки в святую кровь, рисовали красные кресты на своих снежно-белых одеждах... Я чувствовала, как у меня начали вставать дыбом волосы. Это напоминало какое-то жуткое священнодействие, которого я пока ещё не могла понять...
– Зачем они это делают, Север?.. – тихо, будто боясь, что меня услышат, шёпотом спросила я.
– Это клятва, Изидора. Клятва вечной мести... Они поклялись кровью Магдалины – самой святой для них кровью – отомстить за её смерть. Именно с тех пор и носили Рыцари Храма белые плащи с красными крестами. Только почти никто из посторонних никогда не знал их истинного значения... И все почему-то очень быстро «позабыли», что рыцари Храма до гибели Магдалины одевались в простые тёмно-коричневые балахоны, не «украшенные» никакими крестами. Рыцари Храма, как и катары, ненавидели крест в том смысле, в котором «почитает» его христианская церковь. Они считали его подлым и злым орудием убийства, орудием смерти. И то, что они рисовали у себя на груди кровью Магдалины, имело совершенно другое значение. Просто церковь «перекроила» полностью значение Рыцарей Храма под свои нужды, как и всё остальное, касающееся Радомира и Магдалины....
Точно так же, уже после смерти, она во всеуслышание объявила погибшую Магдалину уличной женщиной...
– так же отрицала детей Христа и его женитьбу на Магдалине...
– так же уничтожила их обоих «во имя веры Христа», с которой они оба всю жизнь яростно боролись...
– так же уничтожила Катар, пользуясь именем Христа... именем человека, Вере и Знанию которого они учили...
– так же уничтожила и Тамплиеров (Рыцарей Храма), объявив их приспешниками дьявола, оболгав и облив грязью их деяния, и опошлив самого Магистра, являвшегося прямым потомком Радомира и Магдалины...
Избавившись от всех, кто хоть как-то мог указать на низость и подлость «святейших» дьяволов Рима, христианская церковь создала легенду, которую надёжно подтвердила «неоспоримыми доказательствами», коих никто никогда почему-то не проверял, и никому не приходило в голову хотя бы подумать о происходящем.
следует предварительно профильтровать.
Проба с сульфосалициловой кислотой. Наиболее чувствительной и распространенной является проба с 20% раствором сульфосалициловой кислоты.
Ход определения. Две химические пробирки помечают: «О» - опыт и «К» - контроль. В обе пробирки наливают 4-5 мл прозрачной мочи. В опытную пробирку добавляют 4-5 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты, хорошо перемешивают. Обе пробирки рассматривают рядом на черном фоне. При наличии белка в опытной пробирке отмечается помутнение. Контрольная пробирка служит для сравнения. Чувствительность пробы с сульфосалициловой кислотой 0,015 г/л.
Продукты расщепления белка - альбумозы - также дают положительную реакцию с сульфосалициловой кислотой. Для выяснения причины помутнения пробу нагревают. При этом помутнение, вызванное присутствием альбу-моз, исчезает, а помутнение, вызванное присутствием белка, усиливается.
Кольцевая проба Геллера. Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 1 - 1,5 мл 50% азотной кислоты или реактива Ларионовой. Затем наслаивают на
кислоту такое же количество мочи, так, чтобы жидкое не смешивались. При наличии белка на границе жидкосте] возникает белое кольцо. Реакцию оценивают на черном фоне и учитывают время появления нитевидного кольца Чувствительность пробы 0,033 г/л. При таком содержании белка на границе жидкостей появляется белое нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами.
Техника наслаивания. Мочу всегда наслаивают на кислоту, так как относительная плотность мочи ниже, чем кислоты. Наслаивание производят пастеровской пипеткой с баллоном, которой набирают небольшое количество мочи. Затем мочу вносят в узкую часть центрифужной пробирки, держа ее наклонно, наслаивают по каплям, медленно опуская мочу по стенкам пробирки.
Недостаток пробы заключается в появлении пигментного кольца от окисления урохрома азотной кислотой, Это коричневатое кольцо может мешать определению. В моче, содержащей ураты, иногда появляется беловатое кольцо выше границы жидкостей.
Более четкий результат пробы Геллера получается, если вместо 50% раствора азотной кислоты используют реактив Ларионовой (1% раствор азотной кислоты насыщенном растворе хлорида натрия).
Количественное определение
Количество белка в моче можно определить двумя способами: 1) методом Брандберга-Робертса - Столь-никова с разведением мочи; 2) по помутнению, образующемуся при добавлении 3% сульфосалициловой кислоты.
Метод Брандберга - Робертса - Стольникова. В основу этого метода положена кольцевая проба Геллера. Известно, что при содержании белка в моче в количестве 0,033 г/л образуется нитевидное кольцо на 2-3-й минуте Если белка в моче содержится больше, чем 0,033 г/л, то кольцо появляется раньше, причем не нитевидное широкое. Такую мочу следует развести дистиллированной водой и вновь уже с разведенной мочой проделать наслоение на азотную кислоту. Если после наслоенш появляется нитевидное кольцо между 2-й и 3-й минутами, то разведение следует считать законченным. Количество белка в этом случае определяют, умножая 0,033 г/л нг степень разведения мочи. Разведение мочи подбирают пользуясь следующей ориентировочной оценкой свойст! кольца: если после наслаивания сразу появилось нитевидное кольцо, мочу разводят в 2 раза, если сразу появилос1 широкое кольцо-в 4 раза, если сразу появилось компак тное кольцо-в 8 или 10 раз.
Разведение мочи делают в мерной центрифужной робирке, наливая мочу до метки 1 мл и доливают водой до той метки, во сколько раз делается разведение. Содержимое пробирки тщательно перемешивают пастеровской пипеткой с баллоном.
Иногда приходится разводить мочу несколько раз. В этом случае при подсчете количества белка учитывают все разведения. Пример. При наслаивании цельной мочи появилось сразу компактное кольцо. Разводят мочу в мерной центрифужной пробирке в 10 раз (1 мл мочи и 9 мл воды до метки 10). Наслаивают разведенную в 10 раз мочу на азотную кислоту. Если сразу появляется широкое кольцо, то определение не закончено, его следует продолжить. Из первого разведения в 10 раз необходимо сделать еще разведение в 4 раза. Общая степень разведения в этом случае будет равна 40 (10x4). С разведенной в 40 раз мочой вновь ставят кольцевую пробу Геллера. При появлении нитевидного кольца между 2-й и 3-й минутами определение следует считать законченным.
При работе можно пользоваться поправкой Эрлиха- Альтгаузена, в случае, если нитевидное кольцо появляется ранее 2-й минуты. Чтобы не разводить мочу дополнительно, авторы предложили определить время появления нитевидного кольца и внести в расчет поправку на время. В этом случае количество белка рассчитывают умножая 0,033 г/л на степень разведения и на поправку. Значения поправок сведены в табл. 3.
Таблица 3. Значения поправок для определения белка
Время образования" Поправка кольца, мин Время образования Поправка кольца, мин
В основу метода положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что на границе азотной кислоты и мочи при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.
Необходимый реактив
30%-ный раствор азотной кислоты (относительная плотность 1,2) или реактив Ларионовой.
Приготовление реактива Ларионовой: 20—30 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты.
Ход исследования
В пробирку наливают 1—2 мл азотной кислоты (или реактива Ларионовой) и осторожно, по стенке пробирки, наслаивают такое же количество профильтрованной мочи. Появление тонкого белого кольца на границе двух жидкостей между 2 и 3-й минутой указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. Если кольцо появляется раньше 2 мин после наслаивания, мочу следует развести водой и провести повторное наслаивание уже разведенной мочи. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, т.е. его ширины, компактности и времени появления.
При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком — в 4 раза, при компактном — в 8 раз и т.д. Концентрацию белка при этом вычисляют путем умножения 0,033 на степень разведения и выражают в граммах на 1 л (г/л).
Иногда белое кольцо получается при наличии больших количеств уратов. В отличие от белкового кольца уратное появляется немного выше границы между двумя жидкостями и растворяется при легком нагревании.